Thursday, March 13, 2008

انتشار الميكروبات في الطبيعة

انتشار الميكروبات في الطبيعة

تعتبر الكائنات الدقيقة ، أي الميكروبات الموجودة بوسط معين جزءاً من النظام البيئي
Ecosystem وأكبر نظام بيئي بالنسبة للإنسان هو كوكب الأرض بكل ما يحتوية ، وهو مايسمي بالمجال الحيوي أو البيوسفير ويتكون اي نظام بيئي من مكونين أساسيين ، مجتمع الكائنات Community of microorganisms العائشة بهذا النظام ، والمكونات الغير حيه الموجوده به non- living compounds من مواد طبيعية وكيمائية .
النظام البيئي في حالة ديناميكية ويتضح ذلك من عدد الكائنات الحية وتنوعها بالوسط، وتشكل الكائنات الحيه الدقيقة بأعدادها ونظامها ونشاطها ، المكون الأساسي ، من بين جميع الكائنات الموجوده بأي نظام بيئي ، ومن الطبيعي أن تتواجد الكائنات الدقيقة في الاوساط المتعددة بأنواع مختلفة ، حسب ظروف ذلك الوسط، كما أنها تنشط وتؤدي عملياتها الحيوية بطرق مختلفه.
لذا فالمجتمع الميكروبي جزء من النظام البيئي ، فالميكروبات الموجودة بالماء تختلف في إعدادها وأنواعها وطرق نشاطها عن تلك الموجوده بالتربه حول جذور النبات في المادة الغذائية أو في خلايا العائل المريض ، ونادراً ما تتواجد الكائنات الدقيقة في اوساطها الطبيعية في صورة مزارع نقية فعند تحليل عينات مختلفة من الأرض او الماء نجد انها تحتوي علي أنواع واعداد مختلفة من الكائنات الدقيقة من فيروسات وبكتريا وخمائر وفطريات وطحالب وبروتوزرا تعيش هذه الكائنات الخليطــة مع بعضها بالوسط وتقوم بنشاطهـا بصورة متداخلة مابين التعاون والفساد
ويستمر الكائن الدقيق متواجد بالوسط، طالما كانت الظروف البيئية مناسبة لنموه وتكاثره ، لكن عند حدوث تغير بالوسط في بعض ظروفـه الطبيعية والكيمائية مثل نفاذ المواد الغذائية أوحدوث تغير كبير في دراجة الحرارة أوالحموضة أو التهوية أو الاضاءه ، فان الكائن الموجود بالوسط مالم يحدث له تأقلم أو تطفر فأنه يترك مكانه لأخر تناسبة ظروف الوسط الجديده وما حدث بها من تغير فأننا نجد أن لظروف الوسط تأثيراً انتقائي علي ما به من كائنات حية دقيقة .
التمييز بين أفراد مجموعة بكتريا القولون

للتمييز بين أفراد مجموعة بكتريا القولون ، تجري مجموعة اختبارات تعرف باسم الIMVC test وهي اختبارات الاندول احمر الميثيل فوجز بروسكور ، سترات الصوديوم . بالإضافة إلي ذلك ، قد يجري اختبار ايكمان علي بيئة ماكونكي السائلة والتحضين لمد 24 ساعة علي درجة 44 م . والكشف عن تكون حامض وغاز .
فإذا ثبت بعد هذه الاختبارات وجود ميكروب فمعني ذلك أن الماء المختبر لايصلح للشرب وللاستعمالات الاخري .
(1) – اختبار انتاج الاندول :.
تستطيع بعض الميكروبات أن تحلل الحامض الاميني تريبتوفان مع إنتاج مركب الاندول وتستعمل هذه الظاهرة
في التعرف علي بعض الميكروبات.
الكشف عن الاندول :
إذا تكون الاندول فان ورق حامض الاكساليك يتلون باللون الوردي إذ أن الاندول مادة طيارة فإذا تكون بفعل الميكروب فإنه يتحد مع بللورات حامض الاكساليك مكونا لونا ورديا ويعتبر هذا الاختبار خاص للاندول .
(2) - اختبار احمر الميثيل:.
يعتبر اختبار احمر الميثيل كدليل علي كمية الحامض المتكونة بواسطــة أفراد مجموعة الكوليفورم فعند تخمر كمية معلومة من الكربوهيدرات فان E.coli تنتج كمية من الحامضي أكثر من ال Enterobacter aerogenus وعلي ذلك يستعمل هذا الاختبار للتمييز بينما فالاولي تنتج كمية من الحامض كافية لتغير لون دليل احمر الميثيل إلي اللون الأحمر بينما الثانية لاتنتج من الحامضي مايكفي لتغيير لون الدليل فيظهر لونه أصفر.
(3) - اختبار تمثيل السترات:.
يستطيع ال Enterobacter aerogenus أن تمثل سيترات الصوديوم كمصدر للكربون فى بيئة مكونة من أملاح معدنية بينما E.coli لاتستطيع . فتكون النتيجة نمو ميكروبات Enterobacter aerogenus وعدم مقدرة ال E.coli علي النمو في بيئة السيترات ويستخدم هذا الاختبار للمقارنة بينهما ، ويسمي هذه الاختبار باختبار كور.
اختبار فوجز بروسكاور
اختبار ايكمان
اختبارالكشف عن تلوث المياه بمياه المجاري
واختبار المياه للتلوث بمياة المجاري ( ووجود ميكروبات القولون ) يجري في العاده علي 3 خطوات هي:
1
الاختيار الاحتمالي
2
الاختيار التحقيقي
3
الاختيار التكميلي
اولا : الاختبار الاحتمالي
لاختيار وجود مجموعة ميكروبات القولون يجري ذلك الاختبار بتقيح بويون اللاكتوز أو بيئة ماكونكي السائلة بعينه المياه المطلوب فحصها فإذا تكون حامض وغاز حوالي 10% أو أكثر من حجم أنبوبة درهام في خلال 24 ساعة فان هذا الاختبار ( الاحتمالي ) يكون موجبا ، أما إذا تكون حامض و غاز في هذه البيئة بعد 24 ساعة أخري فان نتيجة الاختبار يكون مشكوكا فيها وعلي ذلك تجري الاختبارات الاخري ، اما عدم وجود الغاز و الحامض بعد 48 ساعة فيؤخذ ذلك دليلا علي ان الماء غير ملوث وصالحا للشرب ولا داعي لإجراء أي اختبارات أخري. ولاجراء الاختبار الاحتمالي تتبع الخطوات الاتيــة.
· - الادوات و البيئات اللازمــة .
1-
عينة المياه.
2-
25 انبوبة اختبار تحتوي كل منها علي 9 مل من بيئة بويون اللاكتوز المحتوية علي دليل بروم ثيمول بلو وأنبوبة درهام أو بيئة ماكونكي السائلة.
3-
ماصات 1سم معقمــة.
4-
ماصات 10 سم معقمــة.

· خطوات العمل :-
1-
رج عينة المياه جيداً حوالي 25 مره
2-
انقل بواسطـة ماصة معقــمــة مقدار1مل من عينة الماء إلي انبوبة بها 9 مل ماء معقم فيصبح التخفيف 10-1
3-
استمر في عمل سلسلة التخفيفات حتى التخفبف 10-5 مع ملاحظــة كتابة ارقام التخفيفات علي الأنابيب مع استعمال ماصـه واحدة لكل تخفيف بشرط أن تكون معقمــة.
4-
لقح كل من كل تخفيف 5 أنابيب محتوية علي بيئة ماكونكي السائلة ( كل منها يحتوي علي 9 مل بيئة ) بمقدار 1 مل من التخفيف الخاص بها.
5-
حضن جميع الانابيب ( 25 انبوبة ملقحة ) علي 37 °م لمدة 24 ساعة.
6-
اختبر الانابيب لوجود حامضي (تغير لون البيئة من البنفسجي او القرمزي الى اللون الاصفر) وغاز (بنسبة 10% من انبوبة درهام ) بعد 24 ساعة فإذا لم يتكون غاز حضن لمدة 24 ساعة أخري و لاحظ نتيجة وجود الغاز من عدمــه بعد كل مده (24 ساعه، 48 ساعه ).
7-
إذا لم تتكون غاز بعد 48 ساعة تعتبر النتيجــه سلبيه ، ولاتجري الاختبارات التالية.
ويجدر بالذكر أن عينات المياه التي تعطي نتيجة ايجابية في الاختبار الاحتمال . لاتعني ضرورة وجود ميكروبات القولون بها، فقد يتكون الحامض والغاز لاسباب اخري منها.
1- وجود بكتريا لاهوائية محللة لسكر اللاكتوز مثل وجود انواع من Clostridium مع بعض البكتريا الهوائية.
2- وجود بكتريا متجرثمــة . لها القدرة علي تحليل سكر اللاكتوز مع انتاج حامض وغاز ، مثل Bacillus
3- ظاهرة التنشيط ( التآزر ) وفيها يحلل أحد الميكروبات سكر اللاكتوز ، وينتج حامضا ومركبات وسطيـة . بينما يوجد ميكروب آخر يحلل بعض تلك المركبات الوسطيـة ، وينتج غاز ، مثل وجود ميكروبي .. الذي ينتج الحامض و ... الذي ينتج الغاز ويلاحظ أن الغاز لايتكون . الإعند وجود الميكروبين معا بالوسط.
· النتائج و الحسابات.
التخفيف
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
النتيجه الموجبة
5
5
3
2
1

*- يتم تحديد P1 = اقل تخفيف يعطي اعلى نتيجة موجبة , يليها P2 و P3
اعداد ميكروبات القولون في 1 مل عينة مياه = قيمة P الجدولية χ مقلوب التخفيف الاوسط ( تخفيف P2 ).
قيمة P الجدولية = يتم استخراجها من جدول كوكرن
ثانيا : الاختبار التحقيقي
إذا كان الاختبار الاحتمالي السابق الذكر مشكوكا فيه بمعني ظهور أي كميه من الغاز بعد 48 ساعة من التحضين فيجب إجراء الاختبار التحقيقي.
يستعمل عادة أحدي بيئتين في الاختبار التحقيقي وهما:.
1- بيئة الEosein methylen blue ويرمز لها E.M.B
2- بيئة ال Endo agar
ويلاحظ الاتي:.
1- مجاميع تظهر علي بيئة ال E.M.B ذات مركز أسود ولمعان معدني مخضر ( تشبه الكوبيا ) وهذه هي مجاميع ال E.coli بينما تظهر مجاميع ال Enterobacter aerogenus علي هذه البيئة بنيــة المركز وخالية من اللمعان.
2- إذا استعملت بيئة ال Endo agar فتظهر مجاميع ال E.coli ذات مركز غامق وتتلون البيئة حولها بلون أحمر غامق وقد يكون أو لايكون لها لمعان معدني أما مجاميع ال Enterobacter aerogenus فلا يظهر لها المركز الغامق وتكون معتمــه وردية اللون.
· الادوات و البيئات اللازمــة :.
1-
أطباق بتري تحتوي علي بيئة الEosein methylen blue
2-
أنابيب بيئة ماكونكي السائلة التي أظهرت اختبار احتماليا مشكوكا فيه

· بيئة ال Eosein methylen blue
تحضر هذه البيئة باضافة كميــة معلومة من سكر اللاكتوز مع الصبغتين الEosein و methylen blue والاجار المغذي ثم يصب المخلوط بعد ضبط ال PH و التعقيم في أطباق بتري معقمة و تترك حتى تتصلب ثم يتم التخطيط عليها من انابيب بيئة ماكونكي السائلة المشكوك فيها .
· يعتمد لون المجاميع التي تظهر علي هذه البيئة علي عاملين هما.
1- تفاعل الايوسين ( وهي صبغــة حامضة ) مع الميثلين الازرق وهي ( صبغة قاعدية ) لتكون صبغة مركبة لها خواص متعادلة.
2- تكوين كمية من الأحماض نتيجة لتخمر اللاكتوز من شأنها خفض الرقم الايدروجيني ( PH ) مسببا امتصاص الصبغة المركبة علي الخلايا المكونة للمجموعة.
ويلاحظ أن الميكروبات التي لاتخمر اللاكتوز غالبا ما تكون شفافة ( لا لون لها ) إذ ان الصبغة المركبة لا تؤخذ علي الخلايا في وسط قلوي بينما تظهر البيئة بلون احمر .
· بيئة ال Endo agar
تحضر هذه البيئة باضافة لاكتوز ، فوكسين قاعدة ( سبق أزالة اللون منه بواسطــة إضافة كبريتيت الصوديوم إلي بيئة الاجار المغذي المنصهر ثم صب المخلوط بعد ضبط ال PH و التعقيم في أطباق بتري معقمة
ويعتقد ان ال...... يعمل كبيئة تحجز الاستيلدهيد وهي المادة المسئولة عن التفاعل ، فهذة المادة عبارة عن مركب وسطي ينتج عن تخمير اللاكتوز وتكون مركبا مع كبرتيت الصوديوم ثم يتحلل هذا المركب وينشأ عن ذلك ظهور لون أحمر في منطقة المجاميع المنتجة للاستيلدهيد.
أما المجاميع التي لا تحلل اللاكتوز تظهر لا لون لها بينما تظهر البيئة بلون وردي خفيف.

· خطوات العمل :-
1-
قم بصب كل من بيئتي الايوسين ميثيلين بلو والاندو اجار في اطباق بتري معقمة.
2-
لقح الاطباق من أنبوبة بويون اللاكتوز التي أظهرت اختباراً احتماليا مشكوكا فيه وذلك بطريقة التخطيط.
3-
اقلب الاطباق وحضن علي 37م لمدة 24 ساعة.
4-
بعد فترة التحضين أختبر المجاميع ودون النتائج في جدول مع مقارنة مجاميع الميكروبات التي تظهر على البيئات



لاحظ المستعمرات المنفردة بعد النمو

ثالثا: الاختبار التكميلي
يجري الاختبار التكميلي عادة للتأكد من أن المجاميع التي ظهرت علي الاطباق في الاختبار السابق تتبع مجموعة القولون ويشمل :.
1- ان الميكروب المعزل من الاختبار الاحتمالي الايجابي يستطيع أن يخمر اللاكتوز ثانية.
2- أن المجاميع النامية علي البيئتين السابقتين والتي تظهر تحت الميكروسكوب عند فحصها بطريقة جرام : خلايا عصوية قصيرة سالبة لصبغة جرام غير متجرثمة وأنها تتبع مجموعة القولون.
الأدوات و البيئات اللازمــة :
1-
اطباق التخطيط الناتجة من الاختبار التحقيقي والتي ظهرت عليه مجاميع حقيقية وغير حقيقية لمجموعة القولون .
2-
3 انابيب من بيئة ماكونكي السائلة.
3-
آجار مغذي مائل.
4-
شرائح نظيفة.
5-
صبغة جرام .

· خطوات العمل :-
1-
خذ بواسطــة أبرة معقمـة جزءا من كل من مجاميع الكوليفورم النامية عل كل من البيئتين السابقتين ولقح بها أنابيب بيئة ماكونكي السائلة ، وكذلك أنبوبة آجار مائل.
2-
ضع الأنابيب في المحضن علي 37 م
3-
بعد 24 ساعة أعمل غشاء من الاجار المائل وأصبغة بطريقة جرام وافحص الميكروب
( خلايا عصوية قصيرة سالبة لصبغة جرام غير متجرثمـة )
4-
بعد 48 ساعة اختبر أنابيب بيئة ماكونكي السائلة لوجود حامض وغاز.

الكشف عن الميكروبات المرضية

الكشف عن الميكروبات المرضية
( كاشفات التلوث الحيوية )
==================
الكشف عن الميكروبات الحيوية بالماء آمر بالغ الصعوبة إذا أن هذه الميكروبات قد توجد اعداد قليلة مما يجعل من الصعب عزلها في مزارع نقية ، كما أنه من السهل تمييزها بالشكل الخارجي عن الميكروبات الأخري غير المرضية ، فإذا ما اريد الكشف عنها وتمييزها عن غيرها ، فإن ذلك يتطلب عملا ومجهودا كبيرا ، ووقتا طويلا قد يحدث أثناءه خطر ، وبالرغم من ذلك ، فقد لا يتوصل إلي نتائج مرضية ، لكل هذه الصعوبات ، فإنه يلجا للكشف عن الميكروبات المرضية بطريقة غير مباشرة.
ونظرا لان أهم الأمراض التي تنتقل عن طريق المياه هي التيفود والباراتيفود / والكوليرا والدوسنتاريا المعوية ، وهي كلها تتسبب عن ميكروبات معوية تـأتي من المواد البرازية لذلك فان وجود مياه مجاري في مياه الشرب يدل علي أن هذه المياه خطرة ، إذ قد تحتوي علي واحد أو أكثر من الميكروبات المرضية ، السابق الإشارة إليها ، ومن المعروف ، أن أمعاء الإنسان ، والحيوانات ذات الدم الحار ، تحتوي علي اعداد كبيرة من الميكروبات أغلبه من النوع غير الضار ، ومن الميكروبات التي وجدت بكثرة في البراز Escherichia coli
وعلي ذلك ، فإن وجود ميكروب E. coli في ماء الشرب ، يؤخذ كدليل حيوي علي تلوث هذه المياه بمياه المجاري ، إذ تعتبر هذه الميكروبات كاشفات للتلوث ، ويعني هذا ، أن المياه التي يوجد بها كاشفات التلوث يحتمل أن يوجد بها ميكروبات مرضة معوية ، مثل هي التيفود والباراتيفود والكوليرا والدوسنتاريا المعوية ، مثل تلك المسبب لشلل الاطفال.
والاسباب التي دعت لاختيار E.coli كديل حيوي للكسف عن التلوث هي :-
1- أن الكشف عن هذه البكتريا ميسور.
2- أن هذه البكتريا من السهل تداولها فهي غير ممرضة ، ولاتضر القائمين بالعمل .
3- مصدرها برازي، وتوجد دائما بالمياه الملوثه مادامت البكتريا الممرضة موجودة بها .
4- تعيش بالمياه لمدة اطول من الميكروبات المرضية.
5- المياة السليمة غير الملوثة خالية من هذه البكتيريا .
ونظراً لان بكتريا E.coliمصدرها برازي ، بينما يوجد افراد أخري من البكتريا القولون ، مصدرها
غير برازي وقادرة أيضا علي تحليل سكر اللاكتوز ، لحامض وغاز مثل البكتريا التي توجد علي النباتات والحبوب وفي التربة ، ومثل البكتريا التي مصدرها القناة التنفسية .
لذلك فإنه بعد الكشف عن مجموعة بكتريا القولون بالمياه فإنه يجب التمييز بين الميكروبات المحلله لسكر اللاكتوز البرازيــة وغير البرازيــة ، حتي يتسني الحكم بدقة علي تلوث مياه الشرب بمياه المجاري أما باقي البكتريا المعوية ، فهي غير محللة لسكر اللاكتوز.تنتمي بكتريا coli Escherichia إلي مايسمي بمجموعة بكتريا القولون و تتصف هذه المجموعة بأنها عصوية قصيرة ، سالبة لصبة لجرام ، غير متجرثمة ، اختيارية للهواء ، تحلل سكر اللاكتوز ....

ميكروبيولوجيا المياة

ميكروبيولوجيا المياه والمجاري
.....................................
* - مقدمــة :.
نظراً لأن الماء يعتبر مصدرا هاما في حياه الإنسان لذلك يجب حمايته والمحافظــة عليه من التلوث ومن مظاهر التلوث لمصادر المياه هو وجود تيفود وبائي أو ظهور سمك ميت علي شواطي البحيرة ويحدث التلوث نتيجة لإلقاء المخلفات في المياه مما يسبب تغيرات جوهرية وضارة في أنواع وأعداد ونشاط الميكروبات الموجود بالوسط المائي.
وأمثلة تلوث مصادر المياه بالمخلفات البرازيــة المسببة لانتشار الأمراض مثل الحمي التيفودية
ولكي نتمكن من مراقبة الاستخدام السليم في المياه يجب ان تكون لدينا طرق ووسائل للكشف علي التلوث وقياسه.
* - التحليل القياسي للمياه.
للكشف عن صلاحية المياه للشرب لابد من إجراء مجموعة من التحاليل المعملية حتي يمكن الحكم علي مدي صلاحية هذه المياه للشرب وهذه التحاليل تتمثل في.
الفحص البكتريولوجي :-
والهدف الأساسي من هذه التحاليل هو معرفة ما إذا كانت مصادر المياه تحتوي علي ميكروبات برازيــة حيث يوجد وجود هذه ميكروبات برازيــة ( وليست بالضرورة أن تكون مرضيــة ) حيث يؤخذ وجود هذه الميكروبات البرازيــة كدليل علي تلوث المياه بالمخلفات الآدميــه أو الحيوانية وبصفة عامة فإن الميكروبات التي يبحث عنها هي بكتريا القولون و هي المجموعة التي تشمل كل الميكروبات الهوائية والاختيارية والتي تتميز بأنها عصويات قصيرة مستقيمة سالبة جرام – غير متحركة – تخمر سكر اللاكتوز مع أنتاج غاز.
الفحص أو التحليل الكيمائي :-
وفي هذا النوع من التحليلات يتم قياس العناصر والاينونات التي يدل وجودها بتركيز عالي علي تلوث المياه مما يؤدي للإضرار بصحة الإنسان والحيوان والنبات.
حيث يتم قياس :-
1)- تقدير الأملاح الكلية الذائبـة بطريقة التوصيل الكهربي ( . (E.C
2)- تقدير رقم ال ( رقم الحموضة )
3)- تقدير انيونات الكربونات و البيكربونات و الكلوريدات.
4)- تقدير الكبريتات.
5)- تقدير المادة العضوية والنيتروجين.
بالاضافة إلي قياس بعض العناصر الضارة عند وجودها بتركيز عالي في عينة المياه مثل عنصر البورون – الموليبيدنم – الرصاص .. الخ
من خلال مجموعة مجموعة التحليلات السابقة يمكن الوقوف علي مدي صلاحية المياه للشرب وذلك من خلال الجداول القياسية الخاصة بنسب هذه العناصر في المياه.
اولأ:. الفحص البكتريولوجي للمياه.
الطرق المتبعـة لتقدير اعداد البكتريا في الماء لا يعطي الإجزء من العدد الفعلي للكائنات لأن معظم الميكروبات لا تنمو علي البيئة المستخدمــة ولايهمنا العدد الكلي بدرجة كبيرة مثل ما يهمنا بوجه خاص تواجد مجموعة بكتريا القولون التي قد تصل إلي المياه عن طريق التلوث بمياه المجاري ولذلك فإنة لاختبار صلاحية عينه المياه لاغراض الشرب والاستخدام المنزلي وللاستخدام في المصانع يجري عليها الآتي:.
العد الكلي للميكروبات في عينة المياه........... اختبار تلوث العينة بمياه المجاري
*- طريقة اخذ العينات للتحليل
- الشروط الواجب أخذها في الاعتبار عند أخذ عينة مياه للتحليل.
1- يجب أن تمثل العينة مصدر المياه المطلوب فحصه.
2- يجب ان تمثل العينة مصدر المياه المطلوبة فحصه.
3- يجب أخذ الاحتياطات اللازمــة لعدم تلوث العينة أثناء أخذها.
4- عند أخذ العينة من ماء الحنفية يلاحظ تعقيم فوهـة الحنفية باستخدام اللهب مع ترك الحنفية مفتوحـة قبل اخذ العينة لمدة 5 دقائق.
5- عند اخذ العينة من ترعة أو نهر أو أي مصدر مياه أخر فإنه يجب أن تؤخذ من تحت سطح الماء وذلك بفتح غطاء الزجاجة المعقمــة تحت سطح الماء.
6- إذا كانت من مياه الطلمبات تترك الطلمبــة تعمل فترة من الزمن تكفي للتخلص من المياه المخزنــة بالمواسير وذلك قبل أخذا العينة.
7- إذا كانت من مياه معاملة بالكلور يوضع في زجاجة جمع العينات 0.02جم مسحوق ثيو سلفات الصوديوم لكل لتر ، حيث تتحد هذه المادة مع الكلور المتبقي بالمياه فتوقف تأثيره.
8- يجب أن تجري الأختبارات البكتريولوجية مباشرة بعد أخذ العينة وإذا وجد أن الزمن سوف يزيد عن 3 ساعات تحفظ العينات في ثلاجــة من 5 إلي 10 لمنع حدوث أي تغير بالعينــة.
العد الكلي للبكتيريا بالماء كدليل علي صلاحيته للشرب
تعتبر المقياس الامريكية أن الماء صالحا للشرب إذا أحتوي علي عدد كلي من البكتريا أقل من 100 ميكروب ملي مقدرة بطريقة الاطباق علي بيئة الاجار ، المحضن علي درجة 37 م لمدة 24 ساعة ويختلف العدد الناتج بطبيعة الحال باختلاف طريقة اخذ العينة وطريقة التقدير ونوع البيئة ودرجة حرارة التحضين وبالنسبة للمياه المعدنية فيجب أن لا يزيد عدد البكتريا الكلي عن 20 مل وفي المواصفات الأمريكية ، فان الماء الصالح للشرب ، يجب أن يحتوي علي أقل من 2 بكتريا كولاي لكل 100 مل ماء ، فإذا زاد العدد عن 100 كولاي لكل 100 مل فإن الماء لايعتبر صالحا للشرب.
- الأدوات والمواد المستخدمــة :-
- زجاجة عينة مياه معقمــة .
- بيئة آجار التربتون والجلوكوز ومستخلص الخميرة .
- اطباق بتري وماصات معقمــة .
- انابيب مياه مقطره معقمــة بكل انبوبة 9 مل ماء .
- طريقة العمل :-
1 - رج عينة المياه جيداً حوالي 25 مره
2 - انقل بواسطـة ماصة معقــمــة مقدار1مل من عينة الماء إلي انبوبة بها 9 مل ماء معقم فيصبح التخفيف 10-1
3 - استمر في عمل سلسلة التخفيفات مع ملاحظــة كتابة ارقام التخفيفات علي الأنابيب مع استعمال ماصـه
واحدة لكل تخفيف بشرط أن تكون معقمــة.
- ينقل من انابيب التخفيف 1مل إلي أطباق بتري مع ترقيم4
الاطباق بما يتناسب مع كل تخفيف حيث يتم عمل طبقين من كل تخفيف مع ملاحظــة استخدام ماصات معقمـــة
لكل تخفيف علي حده أو استعمال ماصة واحدة معقمة على ان يكون النقل من التخفيف الاعلي إلي الاقل.
5- يلي ذلك صب بيئة آجار التربتون والجلوكوز ومستخلص الخميرة علي الاطباق وذلك بعد إسالة البيئة و تبريدها الى50 – 55 °م ثم تحضن الاطباق مقلوبة علي 37°م لمدة 48 ساعة.

6- بعد انتهاء مدة التحضين يتم عد مجاميع الميكروبات علي الأطباق وتسجيل النتائج حيث تستبعد الأطباق التي
بها أقل من 30 أواكثر من 300 مستعمرة.
7- خذ المتوسط الحسابي من كل طبقين من تخفيف واحد ثم أضرب في مقلوب التخفيف فينتج عدد البكتريا
في 1 مل من العينة.

* يتم اختيار التخفيف 10-3 لأنه الاقرب للتركيز الاعلى.
اعداد الميكروبات الكلية في 1 مل عينة مياة = متوسط اعداد الميكروبات في التخفيف χ مقلوب التخفيف
اعداد الميكروبات الكلية في 1 مل عينة مياة = (300+280 )/2 χ 103
اعداد الميكروبات الكلية في 1 مل عينة مياة = 290χ 103
اعداد الميكروبات الكلية في 1 مل عينة مياة = 2.90χ 104
C.F.U = Colony Forming Unite

Wednesday, March 12, 2008

ترحيب بالمشاركون

السلام عليكم و رحمة الله و بركاتة
يسعدني ان ابدأ هذا العمل المتواضع و اسأاكم المشاركة معي
د.ياسر